一、技术概述 消毒是消灭外界环境中的病原菌、切断和预防疫病发生和流行的主要措施，是构建养猪场生物安全体系的重要环节。由于经过高度选育的猪群对疾病的非特异性及特异性免疫记忆逐代降低，而当前有限的饲养空间面积与高密度的饲养模式又进一步加剧了猪群抵抗力的降低。某些动物传染病缺乏有效的疫苗防控，猪群的健康问题已成为养猪业发展的主要障碍。随着国外发达养猪业健康养殖理念的逐渐深入，生物安全体系构建的重要性越来越被人们所重视。而规范、健全的消毒技术、合理的消毒制度、科学的养殖条件等能够最大限度地降低猪场暴发疾病的风险，保障养殖户获得最大的经济效益。 二、技术要点 消毒剂选择消毒剂应符合《中华人民共和国兽药典》的规定，根据本地区及本场疫病发生情况有针对性的选择消毒药的种类。以选择高效、刺激性低，对设备不会造成损坏，对人和动物安全，低残留毒性，在动物体内不会产生有害蓄积的品种。消毒程序日常消毒次序应为：清扫、冲洗、干燥、消毒养殖场空舍消毒每批猪只调出后首先要清扫舍内粪便及其他污染物，然后用高压水枪清洗舍内的墙壁、顶棚、地面、器具等物品，干燥后再进行消毒药喷雾消毒或熏蒸消毒。养殖场带猪消毒带家畜消毒要选择刺激性小、安全性高的消毒药。先要清扫污物，包括畜笼、地面、墙壁等处的畜粪、羽毛、污垢垫料及房顶、墙角蜘蛛网和舍内的灰尘，再进行带畜喷雾消毒。喷雾时应关闭门窗，按照由上至下、由内至外的顺序进行；消毒时间最好固定，在傍晚或暗光下进行；喷雾时喷头向上喷出雾粒，切忌直对动物头喷雾，雾粒大小控制在120-200微米；每立方米空间用适当消毒液，消毒后切记不要大风速通风换气，防止动物体感温度降低。 消毒池的设置在养殖厂大门口、生产区入口和各栋畜舍门口各设一个与门同宽、长6.0m、深0.3m以上的消毒池，池中装入不易挥发，腐蚀性小，广谱消毒液，保证车辆、人员出入都能进行消毒。 （一）养猪场病原采集 1主题内容与适用范围 本方法具体规定了养猪场病原采集的方法。 本方法适用于养殖场病原采集，用于评价消毒效果。 2采集方法 2.1舍内物体表面样品采集方法 2.1.1范围：舍内墙壁、地面、笼具、水槽、料槽等设备设施。 2.1.2时间：分别于消毒处理前和消毒处理后0.5-1h内进行采样。 2.1.3面积：被采面积＜100cm2取全部表面；被采面积≥100cm2，取100cm2。 2.1.4区域：内墙壁选择4点（东、南、西、北墙各1点），距地面垂直高度80-150cm，分别位于墙壁的中央平整处，避开通风和降温设施。舍内地面选择4点，在人行通道中央平整处。水槽、料槽各选择4点，位于槽的外壁中央平整处。水线选择4点，位于整体中央平整处，沿管线滚动规板。笼具选择4点，位于整体中央平整处。 2.1.5方法：将规板用火焰灭菌后，放置于物品表面，并将有10mL灭菌蒸馏水的带塞试管中浸湿灭菌棉拭子，在试管壁上挤压多余的水分，然后在规板的范围内滚动灭菌棉拭子横竖各5次涂抹取样，将采集好样品的棉拭子在火焰旁，用灭菌好的剪刀剪去手持端使其落入装有5mL灭菌蒸馏水的带塞试管中，塞进试管，以同样方法在同一物体上的不同处采样4个，盖好，标记并记录送检。 2.2舍内空气样品采集方法 2.2.1范围：舍内空气。 2.2.2时间：分别于消毒处理前和消毒处理后0.5-1h内进行采样。 2.2.3区域：水平放置于畜舍内东西南北4角，距墙1m处和中间各1个。 2.2.4高度：动物头的平行高度。 2.2.5方法：采用空气采样器或平板沉降法采样，将灭菌的营养琼脂平板，平皿盖同时打开，如不方便同时操作，要准确计时，扣放在旁边，根据污染程度暴露一定时间，盖好，标记并记录送检。 2.3舍外道路样品采集方法 2.3.1范围：舍外道路（硬化道路或土路） 2.3.2时间：分别于消毒处理前和消毒处理后0.5-1h内进行采样。 2.3.3方法：硬化道路样品采集方法同2.1；土路为在土壤表层下1-2cm处，用灭菌金属勺或铲取土样200-30g,装于灭菌的容器内，盖好，标记并记录送检。 2.4使用中消毒池样品采集方法 2.4.1范围：各消毒池等。 2.4.2时间：分别于使用中消毒池更换消毒剂前和更换消毒剂后进行采样。 2.4.3区域：消毒池的中央和两边各一点。 2.4.4方法：用灭菌吸管或加样器吸取采样范围内的消毒液，每点至少1ml放入灭菌带盖容器内，每个对象取3个样品，盖好，标记并记录送检。 （二）消毒效果评价方法与标准 1主题内容与适用范围 本方法具体规定了养殖场消毒效果生物学检测方法及其评价标准。 本方法适用于养殖场使用消毒剂的消毒效果评价。 2指示微生物：金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、大肠杆菌（8099或ATCC25922）。 3评价方法 3.1中和剂的选择 不同的消毒剂选择不同的中和剂。中和剂本身及其与消毒剂的反应产物要对微生物没有抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。中和剂的选择可向消毒剂生产厂家询问、索要。 3.2消毒前后样品检测 3.2.1舍内物体表面 用力振打采样试管10-20次或用漩涡混合器混匀样品，使样品中的细菌全部洗入蒸馏水中，用灭菌吸管或加样器无菌取样品0.5mL菌悬液，加入4.5mL装有灭菌蒸馏水的试管中，作10倍倍比稀释，根据样品的污染程度，选择3个适宜稀释度，每个稀释度，分别取0.1mL放入灭菌营养琼脂平板内涂布均匀，每个样品作2个平行，37℃培养24-48h，观察并记录平板上的平均菌落数。 3.2.2舍内空气 采样平皿倒置，37℃培养24-48h，观察并记录平板上的平均菌落数。 3.2.3舍外道路硬路：同3.3.1土路：无菌称取混合后土样10克，放入100mL灭菌生理盐水中，用力震荡，混匀。静置片刻，待泥沙下沉后，取上清液作10倍倍比稀释。据土壤中含菌情况，选择3个适宜稀释度，每个样品做2个平行，37℃培养24-48h，观察并记录平板上的平均菌落数。 3.2.4消毒池 用灭菌吸管或加样器无菌取样品1mL，加入9mL含有中和剂的灭菌蒸馏水中混匀，作用10min，取0.1mL混合液放入灭菌营养琼脂平板中均匀涂布，37℃培养24-48h，观察并记录平板上的平均菌落数。 3.3养殖场消毒效果评价 根据消毒前后细菌菌落平均数计算细菌的消亡率，以消亡率评价消毒药的消毒效果。≥90％，可判为消毒合格。 3.3.1因现场试验环境条件变化较多，难以统一，无法测定准确的自然沉降率，故只按所得消亡率（自然衰亡和消毒处理中杀菌的综合效果）做出验证结论。消亡率的计算按下式进行：消亡率=消毒前样本平均菌数−消毒后样本平均菌数消毒前样本平均菌数%100× 3.3.2举例：某鸡舍，消毒前采样，空气中的平均含菌量为5000cfu/m3。用某消毒剂喷雾对室内空气消毒30min后采样，含菌量减至50cfu/m3。该消毒剂处理30min后，室内空气中自然菌的消亡率可按下面公式计算： 该消毒剂作用30min，可使房间内空气中自然菌的消亡率达99.00%。 3.3.3试验采样完成后，应将未用的同批培养基，与上述试验样本同时进行培养或接种后培养，作为阴性对照。阴性对照组若有菌生长，说明所用培养基有污染，试验无效，更换后重新进行。 3.3.4评价标准：试验重复3次或以上，计算出每次的消亡率。 三、适宜区域及注意事项 适宜区域：该消毒技术适用于北京市规模化及中小型养殖场。 注意事项： 1猪舍进行大消毒前，必须将猪全部转移出去，实施“全进全出”或空舍消毒。带猪消毒注意选择对猪刺激性小的消毒药剂。 2首先要清除舍内粪尿、污物、垫料等有机物，提高消毒药的杀菌作用。因此要坚持“以化学药品消毒为主”的消毒原则。 3消毒药液的浓度、温度和作用时间与消毒杀菌的效果成正比，即消毒药液的浓度越大、温度越高，作用时间越长，其消毒的效果越好。 4猪场平时应多准备几种消毒剂，根据猪场需要及周边疫病情况定期交替使用，以免产生耐药性。

推荐单位：北京农学院

联系人：张永红